凝集素亲和层析法纯化蛋白质实验

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

凝集素是能可逆性结合碳水化合物的蛋白质。因为绝大多数凝集素至少每个分子有两个碳水化合物结合部位，所以它们可以沉淀糖蛋白和凝集细胞。凝集素也就可以用作糖蛋白的亲和配基，具有单糖的糖蛋白可用温和的蛋白质冼脱条件分离。虽然凝集素亲和层折没有很高的选择性，但是无疑它已成为蛋白质纯化的一种常用方法。它通常作为系列纯化步骤之一。凝集素亲和柱也可用于除去作为污染物的糖蛋白。

来源：《蛋白质技术手册》

来源：丁香实验

操作方法

刀豆素 A 亲和柱纯化蛋白质

1. 制备刀豆素 A 亲和柱；2. 用 10 倍柱体积的层析缓冲液（20 mmol／L ，pH 8.0 Tris-HCl，0.15 mol／L NaCl，1 mmol／L MnCl2，1 mmol／L CaCl2，30 mmol／L 辛糖苷）平衡装好的亲和柱；3. 糖蛋白样品液对层析缓冲液透析或用该缓冲液 1：1稀释，然后离心或过滤除去沉淀；4. 将调整好的糖蛋白样品液上样到亲和柱；5. 用层析缓