不连续非变性凝肢电泳实验

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

非变性凝胶电泳，也称为天然凝胶电泳。在凝胶中蛋白质的分离取决于它所带电荷及分子大小。按丙烯酰胺凝胶孔径大小去筛分不同尺寸蛋白质的同时，在分离胶酸性 pH 条件下高电荷的蛋白质的泳动速度会更快。这种方法可以区分仅有一个电荷单位差别的分子。与 SDS-PAGE 电泳相比，非变性凝胶大大降低了蛋白质变性发生的机率。

来源：《蛋白质技术手册》

来源：丁香实验

操作方法

不连续非变性凝肢电泳

1. 工作溶液配制2. 工作溶液用量（1）制备不同厚度电泳凝胶所需的溶液体积制备两块 6 cm×8 cm 的凝胶配制量应比实际用量稍多些。（2）X％分离胶的计算3. 制备分离胶（1）按操作指南装配好灌胶用的模具；（2）将 A 液、B 液和水在小的三角瓶或试管中混合（由于丙烯酰胺具有神经毒性。应戴手套操作）；（3）在温和搅拌下，加入过硫酸铵，TEME 混匀。由于这一步中发生聚合，动作要迅速