最新修订时间:
简介
蛋白激酶的分析是使用标记的供体底物,当酶样品中含有磷酸转移酶活性时,蛋白 质或多肽受体底物中标记物的积累就很容易被检出。
内容来源于《精编分子生物学实验指南(第五版)》
来源:丁香实验
操作方法
1. 每个鉴定反应按以下比例将各反应组分加入 1.5 ml 微量离心管中:4 μl 5 × 酪蛋白激酶反应缓冲液1 μl 10 mg/ml β-酪蛋白1 μl [γ-32P] ATP 溶液(ATP 终浓度为 5 μmol/L, 放射活性为 5 μCi/μl)1~14 μl 水盖好离心管,混匀,放入 30℃ 水浴温育 10 min。2. 加入 1~14 μl 有酪蛋白激酶活性的酶样品开始反应。3.
备择方案 用多肽底物1. 每个分析反应按以下比例将各反应组分加入 1.5 ml 微量离心管中:10 μl 5 × 酪蛋白激酶反应缓冲液5 μl 10 mmol/L用于酪蛋白激酶分析的合成肽底物溶液5 μl [γ-32P] ATP溶液(ATP终浓度为5 μmol/L,放射活性为5 μCi/μl)0~30 μl 水盖好离心管,放入 30℃ 水浴温育 10 min。每个反应的容积为 50 μl,加入水的量取决于加入酶样品的