应用末端截切、进化、再延长技术提高酶稳定性的方法实验

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

提高酶稳定性是改造酶在高温等极端条件下行使其活性理想的设计步骤，同时也能降低酶对蛋白酶剪切的敏感性。由于这些优点，研究者已经发明了很多不同的方法和技术改造蛋白质，但到目前为止这些方法的效果很有限。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒编著。

来源：丁香实验

操作方法

应用末端截切、进化、再延长技术提高酶稳定性的方法

本章主要介绍提高蛋白质热稳定性的常规方法，而不需要在高温下筛选酶活性。介绍完 β 内酰胺酶模型系统（见 16.3.1 )，我们描述末端截切（见 16.3.2 和 16.3.3 ) 的设计方案，它们对酶活的影响（见 16.3.4 )。突变库由酶的定向进化和错误向 PCR 产生（见 16.3.5)，然后在体内应用不同的筛选压力进行筛选（见 16.3.6)。在本节的最后一部分讨论截切突变体的再延长（见