离子交换高效液相层析实验

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

离子交换色谱是利用被分离物质在离子交换树脂上交换能力的不同使组分分离；常用的树脂有不同强度的阳离子交换树脂、阴离子交换树脂，流动相为水或含有机溶剂的缓冲液。

来源：丁香实验

操作方法

阴离子交换HPLC

1. 在使用IEX柱前，依次以序列溶液洗柱去除柱上吸附的蛋白质：10倍柱床的已脱气水和10倍柱床的高盐缓冲液，对聚合体IEX柱，洗柱液在8 ~10，对硅胶类柱，洗柱液pH在7~8。 2. 在室温平衡IEX柱，对4 mm 内径的柱子，以1.0 ml/min 的流速用0.2 mol/l，pH7.5的Tris·Cl缓冲液和Tris/NaCl缓冲液的50%混合液洗20 min，然后用10倍柱床

阳离子交换HPLC

1. 用10倍柱床的已脱气的水冼去柱子的贮存溶剂，并以10倍体积的高盐缓冲液在低pH洗硅胶类或聚合体IEX柱。 2. 如按前述阴离子方案分离，那么应用磷酸钠和磷酸钠/NaCl缓冲液分离蛋白标准，采用以下液体进行梯度洗脱：20 min 以上的0%~80%磷酸钠/NaCl缓冲液线性梯度或用复含梯度：0 min 时10%磷酸钠/NaCl，15 min时60%，20 min 时80%，并保持5