材料与仪器
蛋白质
磷酸钠 NaCl
层析柱 HPLC进样器
磷酸钠 NaCl
层析柱 HPLC进样器
步骤
1. 用10倍柱床的已脱气的水冼去柱子的贮存溶剂,并以10倍体积的高盐缓冲液在低pH洗硅胶类或聚合体IEX柱。
2. 如按前述阴离子方案分离,那么应用磷酸钠和磷酸钠/NaCl缓冲液分离蛋白标准,采用以下液体进行梯度洗脱:20 min 以上的0%~80%磷酸钠/NaCl缓冲液线性梯度或用复含梯度:0 min 时10%磷酸钠/NaCl,15 min 时60%,20 min 时80%,并保持5 min,然后在10 min 以上的时间回复到10%外,在进行下次层析前,保持10%缓冲液15 min。
2. 如按前述阴离子方案分离,那么应用磷酸钠和磷酸钠/NaCl缓冲液分离蛋白标准,采用以下液体进行梯度洗脱:20 min 以上的0%~80%磷酸钠/NaCl缓冲液线性梯度或用复含梯度:0 min 时10%磷酸钠/NaCl,15 min 时60%,20 min 时80%,并保持5 min,然后在10 min 以上的时间回复到10%外,在进行下次层析前,保持10%缓冲液15 min。
来源:丁香实验