用于表达分析的 mRNA 的制备实验

实验分类：

RNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

同时检测包含成百上千种基因的 RNA 水平，从而构建一个详细的基因表达谱是分子生物学新的一项激动人心的本领。这是通过将 mRNA 定量扩增并用生物素标记再与 DNA 芯片杂交实现的，芯片上预先固定有与目的 mRNA 互补的寡核苷酸序列。

来源：《精编分子生物学实验指南第五版第二十一章》

来源：丁香实验

操作方法

基本方案用于表达监测以及与寡核苷酸芯片杂交的 mRNA 扩增

1. 实验前准备1.1 材料样品 RNA：poly（A）＋或总 RNA，有义转录库对照1.2 试剂SuperScript cDNA kit （Life Techologies）T7T24引物RNA 酶抑制剂（Life Technologies 或 Ambion 公司）无 RNA 酶水（DEPC处理过的水，玻璃蒸馏）25：24：1 （V/V/V）酚：氯仿：异戊醇（分子生物学级）7.5 mol/L 乙

备择方案 cDNA 和体外转录产物的固相可逆固定（SPRI）纯化

1. 实验前准备1.1 材料待纯化样品：cDNA（见基本方案步骤 11）或体外转录的 RNA（见基本方案步骤 19）1.2 试剂羧基端包埋的磁珠（cDNA 纯化：PerSeptive BioSystem；体外转录纯化：Bangs Laboratories）0.5 mol/L EDTA3.5 mol/L NaCl/20％（m/V）PEG 8000（分子生物学级；无 RNA 酶）70％（V/V）乙醇