PCR-变性梯度凝胶电泳
别名：
PCR-denaturing gradient gel electrophoresis，PCR-DGGE
最新修订时间：
简介
PCR-变性梯度凝胶电泳，是把 30~50 个 GC 碱基组成的核苷酸链加在其中一条引物的 5' 端，通过 PCR 扩增目的基因，使扩增产物的一端含有 GC 碱基即 GC-clamp。由于 GC-clamp 为扩增片段中 Tm 值最高的区域，而其它部分因所含碱基的种类不同，其 Tm 值也不同，而且明显低于最高 Tm 值。将带有 GC-clamp 的 DNA 片段放入变性剂（尿素和甲酰胺）呈线性梯度增加的聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳，当它泳动到一定浓度的变性区域时（此变性剂浓度的变性效果相当于 DNA 片段中最低解链温度区域的 Tm 值），双链 DNA 便发生部分解链。部分解链的 DNA 分子呈分枝状使迁移速度明显减慢，最后几乎处于停顿状态。只要 DNA 片段中有一个碱基发生变异，就会导致碱基间的协同效应，从 而引起 Tm 值的改变，在不同浓度的变性剂水平上发生部分解链而使泳动几乎停止，最终达到检测基因中发生的突变。目前，用于 PCR-变性梯度凝胶电泳的方法主要有 1 种：PCR-变性梯度凝胶电泳。
原理
PCR-变性梯度凝胶电泳的基本原理是把 30~50 个 GC 碱基组成的核苷酸链加在其中一条引物的 5' 端，通过 PCR 扩增目的基因，使扩增产物的一端含有 GC 碱基即 GC-clamp。由于 GC-clamp 为扩增片段中 Tm 值最高的区域，而其它 部分因所含碱基的种类不同，其 Tm 值也不同，而且明显低于最高 Tm 值。将带有 GC-clamp 的 DNA 片段放入变性剂（尿素和甲酰胺）呈线性梯度增加的聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳，当它泳动到一定浓度的变性区域时（此变性剂浓度的变性效果相当于 DNA 片段中最低解链温度区域的 Tm 值），双链 DNA 便发生部分解链。部分解链的 DNA 分子呈分枝状使迁移速度明显减慢，最后几乎处于停顿状态。只要 DNA 片段中有一个碱基发生变异，就会导致碱基间的协同效应，从而引起 Tm 值的改变，在不同浓度的变性剂水平上发生部分解链而使泳动几乎停止，最终达到检测基因中发生的突变。
应用
PCR-变性梯度凝胶电泳的常用应用领域如下：
检测人类的基因突变，检测从泥土、新鲜水或盐水中得到的细菌样品的生物多样性，检测肠道细菌群的生物多样性，法医鉴定中的线粒体 DNA 检测，HLA 基因组织分型，基因组差异分析，植物学中家谱分析等方面，更多领域的应用正不断被开发。
来源：丁香实验团队
操作方法
PCR-变性梯度凝胶电泳，是把 30~50 个 GC 碱基组成的核苷酸链加在其中一条引物的 5' 端，通过 PCR 扩增目的基因，使扩增产物的一端含有 GC 碱基即 GC-clamp。由于 GC-clamp 为扩增片段中 Tm 值最高的区域，而其它部分因所含碱基的种类不同，其 Tm 值也不同，而且明显低于最高 Tm 值。将带有 GC-clamp 的 DNA 片段放入变性剂（尿素和甲酰胺）呈线性梯度
