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L-DNA标记的等位基因特异性PCR

实验分类:

PCR 技术

最新修订时间:

简介

L-DNA 标记的等位基因特异性 PCR,是将等位基因特异性 PCR 与 L-DNA 标记的 PCR 结合起来。L-DNA 标记的 PCR 扩增的 DNA 是带有序列确定的 L-DNA 标签。L-DNA 是自然存在的 D-DNA 的对映体,由 L-2' 脱氧核昔酸组成。单链 L-DNA 能够与 L-DNA 互补,但不与 D-DNA 互补,由于大分子的手性,自然界的酶如核酸酶、聚合酶也不能对 L-DNA 起作用。因为 Taq DNA 聚合酶在 L-DNA 模板尚不能合成,PCR 反应之后,L-DNA 标记的引物产生的 PCR 产物带有 L-DNA 黏末端,通过表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)成像分析进行 SNP 分型,适用于高通量筛选。目前,用于 L-DNA 标记的等位基因特异性 PCR 的方法主要有 1 种:L-DNA 标记的等位基因特异性 PCR。

原理

L-DNA 标记的等位基因特异性 PCR 的基本原理同等位基因特异性 PCR 相同,两条上游引物,分别在 3' 端含有不同的等位基因,和一条共同的下游引物。所不同的是两条上游引物的 5' 端含有不同的 L-DNA 序列。在图 14-5 中,引物中 5' 端不同的阴影表示不同的 L-DNA 序列,黑色部分代表与靶序列配对的 DNA, 这些引物与不同的模板反应,例如野生型纯合子(WT homozygote)、杂合子(heterozygote)、突变型纯合子 (MU homozygote),会得到不同数量的含 有不同 L-DNA 的 PCR 产物,通过与 SPR 芯片上的互补 L-DNA 序列结合,便可检测到不同的 PCR 产物。

来源:丁香实验团队

操作方法

L-DNA标记的等位基因特异性PCR

L-DNA 标记的等位基因特异性 PCR,是将等位基因特异性 PCR 与 L-DNA 标记的 PCR 结合起来。L-DNA 标记的 PCR 扩增的 DNA 是带有序列确定的 L-DNA 标签。L-DNA 是自然存在的 D-DNA 的对映体,由 L-2' 脱氧核昔酸组成。单链 L-DNA 能够与 L-DNA 互补,但不与 D-DNA 互补,由于大分子的手性,自然界的酶如核酸酶、聚合酶也不能对 L-D

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