在该方案中,用限制性内切酶的混合物处理人类基因组 DNA(内切酶混合物的识别位点为 4bp),产生大概 50〜500bp 的片段。最终使用这一类型的表达文库,是通过利用表型的和生化的筛选方法,分离编码功能多肽或蛋白片段的基因片段。用KlenowDNA 聚合酶处理后,基因组 DNA 片段成为平末端,然后连接到 Pml Ⅰ (—个可以产生平端产物的酶)线性化的载体上,再转化细菌,扩增得到文库。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
用 PCR 控制基因组 DNA 文库的质量实验一、材料
1. 缓冲液、溶液和试剂
ddH20
2. 酶和酶缓冲液
10X Vent 缓冲液
Vent DNA 聚合酶
3. 核酸和寡核苷酸
dNTP,各 20 mmol/L
PCR 引物,可以与基因组 DNA 文库克隆位点两侧的载体序列退火
质粒 DNA(见下面第 1 步)
4. 特殊设备
琼脂糖凝胶电泳所需的试剂和设备,包括溴化乙锭 (见第 5 步)
热循环仪
二、方