帽子转换 RACE 实验

PCR 技术

最新修订时间：2022-02-10

简介

这里介绍的方法，是用一个生物素化的引物来帮助纯化第一链产物。这些纯化技术是可以互换的。与之类似，使用这里所介绍的基于寡核苷酸-(dT) 的引物，在反转录的起始阶段使用的基因特异性引物（如上所述）也是可以互换的。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

来源：丁香实验

操作方法

帽子转换 RACE 实验

试剂 5'RACE 能否成功依赖于帽子发现接头序列结合在 cDNA 合成的起始处。这一步依赖于在第一链 cDNA 末端附加额外的寡核苷酸（dC)。已有证据显示，反转录缓冲液如果存在Mn2+，能大大提高这一步的效率（SchmidtandMueller1999)。第 1 阶段：反转录产生 cDNA 模板一、材料 1. 缓冲液、溶液和试剂 dNTP 溶液（含 4 种 dNTP, 各 10m