相对 RT-PCR: 样品定量实验

PCR 技术

最新修订时间：2022-02-10

简介

已知线性范围的循环参数和 18SrRNA 引物与竞争子的比例，就可以用自己的样品去做相对定量 RT-PCR。下面配制的 PCR 反应混合物包含 9 个反应（4 个样品、4 个非反转录对照、1 个不加模板的对照）及 10% 的额外份额。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

来源：丁香实验

操作方法

相对 RT-PCR: 样品定量实验

一、材料 1. 缓冲液、溶液和试剂去除 RNA 酶的双蒸水 10XRT-PCR 缓冲液（100 mmol/LTris-HCl、pH8.3，500 mmol/LKCl,15 mmol/LMgCl2) 2. 酶和酶缓冲液 MMLV 逆转录酶（100-200U/ul) SUPERaseINRNA 酶抑制剂（20U/ul;Ambion) Taq DNA 聚合酶（5U/ul) 3. 核酸和