菌落 PCR

实验分类：

PCR 技术

最新修订时间：2022-05-19

简介

菌落PCR可用于：（1）重组体的筛选；（2）重组体DNA测序分析。

来源：丁香实验

操作方法

菌落PCR

1. PCR混合液的制备（1）Taq buffer（10x） 180 ul （2）dNTP（2.5 mM） 20~25 ul （3）Primer Forward（引物浓度在10 Pmol） 5 ul （4）Primer Reverse（引物浓度在10 Pmol） 5 ul （5）ddH2O 147 ul （6）Taq（2 U/ul） 12~15 ul 2. 常温下随机挑选转化板上

以质粒为模板的 PCR 实验流程

1、在 0.2 ml PCR 管中配制 25 μL 反应体：2.5 mmol/L dNTP 混合物 2 μL、10 × PCR buffer 2.5 μL、正向引物（10 μmol/mL）1 μL、反向引物（10 μmol/mL）1 μL、稀释后的成熟质粒模板（0.01 μg/μL）1 μL、DNA 聚合酶 1 U（0.5 μL）、高压灭菌 ddH2O 补齐至 25 μL。2、按以下程序在 PCR

以 cDNA 为模板的 PCR 实验流程

1、在 0.2 ml PCR 管中配制 25 μL 反应体系：2.5 mmol/L dNTP 混合物 2 μL，10 × PCR buffer 2.5 μL，正向引物（10 μmol/mL）1 μL，反向引物（10 μmol/mL）1 μL，cDNA 模板 10-100 ng（X μL），DNA 聚合酶 1 U（0.5 μL），高压灭菌 ddH2O 补齐至 25 μL。2、按以下程序在 PCR 仪