用交换反应进行 5' 突出端 DNA 分子的磷酸化

T4 噬菌体多核苷酸激酶催化的交换反应（Van de Sande et al. 1973; Berkner and Folk 1977) 是一个标记 5' 端 DNA 的快速方法。与正向反应不同的是，它无需 DNA 去磷酸化。正向反应在略偏酸性（pH 6.4）的咪唑缓冲液中进行，以刺激酶促去磷酸化 (Berkner and Folk 1977)。交换反应的最佳 K_m 值（ADP 为 300 μmol/L，ATP 为 10 μmol/L），均比在试验管中容易达到的值高，因此标记效率很少超过 30%。然而，交换反应效率通过在反应混合物中加入亚精胺和聚乙二醇大为改善（Lillehauget al. 1976; Harrison and Zimmol/Lmerman 1986a)。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。