cDNA 3'末端的快速扩增（3’-RACE)

DNA 实验

最新修订时间：2022-05-19

简介

在用 oligo (dT) 引物构建的 cDNA 文库中，偶而发生部分 cDNA 克隆缺失了与靶 mRNA 3' 末端互补的序列。这部分序列到底是在 cDNA 合成过程中还是在分子克隆中怎样缺失和在哪个环节中缺失的尚不清楚。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

cDNA 3'末端的快速扩增（3’-RACE)

一、材料 1. 缓冲液与溶液 10X 扩增缓冲液氯仿 4 种 dNTP 贮存液（20 mmol/L，pH 8.0) 胎盘 RNase 抑制剂（20 单位/μl） TE ( pH 7.6) 2. 酶与缓冲液反转录酶（RNA 依赖的 DNA 聚合酶） 5X 反转录酶缓冲液热稳定 DNA 聚合酶 3. 凝胶琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶 4. 核苷酸与寡核苷酸接头引物（

RACE 实验

实验步骤分为 3’ 和 5’ 两部分一、3’RACE1. 反转录生成 cDNA 模板（1）配制反转录混合液：以 20uL 反转录终体系为例，将各组分混合于离心管内，使各组分终浓度如下（冰上操作）：1x 反转录缓冲液，1.3mM dNTP 溶液，12.9 mM DTT，50ng QT 引物，10 U RNA 酶抑制剂；（2）新取一离心管，加入 1ug Poly（A）RNA 或 5ug 总 RNA，