仅扩增全长cDNA末端的高级RACE方法

为了获得全长的cDNA 5’及3’末端序列，许多研究人员使用了称之为cDNA末端快速扩增，或RACE的方法。传统的RACE方法得到的PCR产物含有全长及断裂的cDNA产物。GeneRacer™试剂盒确保您只得到含有全长cDNA末端的完整序列，是您得到更高效的结果并节省您的时间

GeneRacer™的优点：

确定一个基因的全长序列对于研究异源转录起始和得到用于蛋白表达的开放阅读框至关重要。GeneRacer™是一种高级RACE技术，提高了扩增全长cDNA末端序列的效率。使用GeneRacer™试剂盒，您可以得到：

完整序列： 克隆基因片段的全长5'和3'末端以构建完整的cDNA序列

灵敏： 得到每个细胞中拷贝数低至30的稀有转录本的全长5’和3’末端

长度： 可以由长度至少为9kb的转录本得到cDNA

仅通过一轮PCR反应就可以得到这些结果。一般不需进行巢式PCR，所以仅试一次就可以得到结果。

全长5’末端选择：

传统的RACE会得到多个PCR结果，因为其所使用的cDNA来源于断裂及全长mRNA。研究人员必须鉴定每一个PCR产物以获得带有全长5’末端序列的产物。GeneRacer™只针对全长的5’加帽mRNA，从而节省了花费在筛选大量PCR产物上的时间。图一 示意GeneRacer™的工作原理。RNA样品经CIP和TAP处理，保证GeneRacer™寡聚RNA仅同全长转录本连接。然后使用SuperScriptⅡ逆转录酶对这些转录本逆转录，得到的cDNA做为PCR的模板。GeneRacer™寡聚RNA序列做为GeneRacer™ 5’引物结合位点，这样，只有具有全长5’末端的cDNA才会被扩增。使用GeneRacer™步骤及高保真度Platinum® Taq DNA聚合酶，就可以确保得到最高效的实验结果。