循环测序：利用 PCR 和引物末端标记进行双脱氧测序实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本方法成功的关键是模板 DNA 的纯度。琼脂糖、盐和蛋白质的污染都会导致 DNA 聚合酶的提前终止或暂停，而 DNA 和 RNA 降解所产生的寡核苷酸将造成引物错配。这些污染会严重导致假阳性条带或空白出现。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

来源：丁香实验

操作方法

循环测序：利用 PCR 和引物末端标记进行双脱氧测序实验

材料溶液和缓冲液贮存液、缓冲液和试剂的配方请参照附录 1。将贮存液稀释到适当的浓度。 ddNTP 延伸/终止混合物 ddNTP 溶液：四种 ddNTPs, 各 5.0 mmol/L dNTP 溶液：四种 dNTPs, 各 1.0 mmol/L EDTA(0.05mol/L,pH8.0) 甲酰胺上样缓冲液 Tris-Cl(1mol/L,pH8.0) 酶及其缓冲液 AmpliTaq