报道基因活性的同位素分析实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。

来源：丁香实验

操作方法

CAT活性的层析分析法

1. 100 mm 培养皿中的转染了CAT表达质粒的贴壁细胞，用PBS洗两次，每次5 ml每培养皿加入1 ml TEN溶液。将细胞置于冰浴5 min。 2. 用橡胶细胞刮子将细胞从培养皿上刮下来，将其转入一只1.5 ml 的微量离心管中，置于冰浴5 min。 3. 在4℃以最大离心速度离心细狍1 min，细胞沉淀重悬于100 μl 冰冷的0.25 mol/l 的pH7

原位裂解细胞的CAT分析法

1. 60 mm 培养皿中转染了CAT表达质粒的细胞，用2 ml PBS洗1次。每培养皿加入2 ml低渗缓冲液，在室温下温育2~5 min。 2. 吸去低渗缓冲液，加入400 μl Triton裂解液。用橡胶刮子将细胞刮离培养血，用1 000 μl移液器将裂解物移入1.5 ml 微量离心管中。 3. 微量离心1 min 除去细胞核，不可溶性蛋白。将上清转入一个干净的微量离心管中，进行CAT活

CAT活性的相-抽提分析法

一、来源于哺乳动物细胞 1. 按“CAT活性的层析分析法”中的步骤1~5的冻融法，制备哺乳动物细胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制细胞方法来收集细胞，则将原位裂解法的步骤1至4用以下的步骤2至4代替。 2. 室温下，300 g 离心5 min，弃去上清。每107细胞加入1 ml 低渗缓冲液，离心，弃上清。然后每107细胞加Triton裂解液200 μl。二、来源于植物原

人生长激素的放射免疫分析法

1. 取转染了hGH表达质粒的哺乳动物细胞的培养液100~500 μl。 2. 加100 μl 培养液或标准品至12 mm×75 mm 圆底试管中。加入100 μl 125I-标记的抗体溶液，混合。加入1颗亲和素包被珠，盖上试管盖或用Parafilm膜封口，室温下在一水平旋转器上以约170 r/min 摇动下温育90 min。 3. 加2 ml 冼涤液洗磁珠两次。完全吸干洗涤液。