材料与仪器
hGH表达质粒
洗涤液 亲和素包被珠
试管 γ计数仪
洗涤液 亲和素包被珠
试管 γ计数仪
步骤
1. 取转染了hGH表达质粒的哺乳动物细胞的培养液100~500 μl。
2. 加100 μl 培养液或标准品至12 mm×75 mm 圆底试管中。加入100 μl 125I-标记的抗体溶液,混合。加入1颗亲和素包被珠,盖上试管盖或用Parafilm膜封口,室温下在一水平旋转器上以约170 r/min 摇动下温育90 min。
3. 加2 ml 冼涤液洗磁珠两次。完全吸干洗涤液。
2. 加100 μl 培养液或标准品至12 mm×75 mm 圆底试管中。加入100 μl 125I-标记的抗体溶液,混合。加入1颗亲和素包被珠,盖上试管盖或用Parafilm膜封口,室温下在一水平旋转器上以约170 r/min 摇动下温育90 min。
3. 加2 ml 冼涤液洗磁珠两次。完全吸干洗涤液。
图一、人生长激素表达载体
4. 将试管置于γ计数仪上计数1 min。
5. 用试剂盒中的hGH标准品测得的数据绘制标准曲线。用这个标准曲线来计算未知样品的hGH含量。
来源:丁香实验