双脱氧法 DNA 测序实验

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

在基本的双晩氧测序反应中，寡核苷酸引物退火于单链DNA摸板，在4种脱氧核糖核酸三磷酸存在时，引物为DNA聚合酶所延伸。反应混合物中也含有4种双脱氧核糖核苷三磷酸的其中一种，当它掺入到DNA的生长链时，可终止链的延伸。

来源：丁香实验

操作方法

测序酶进行标记测序反应

1. 对于每个单链模板：将下列试剂混合于0.5 ml 微量离心管中（1）0.5 pmol 单链DNA模板（2）0.5 pmol 引物（3）1 μl 10×测序酶缓冲液（4）加水至10 μl （5）用吸管上下抽吸轻轻混匀（避免产生气泡）。于65℃温育6 min，然后于37 ℃温育20 min，转到步骤3。 2. 对于每个双链DNA模板：以下列混合

α-标记核苷酸进行热循环测序反应

1. 对应于毎个待测模板，分别以A、G、C、T标记好4个微量离心管。 2. 分别往标好A、G、C、T的管子中，加A、G、C、T测序混合液各3 μl。 3. 对于单链模板：在0.5 ml 微量离心管中混匀下列试剂（1）0.04 pmol 单链DNA模板（2）0.6 pmol 引物（3）1.5 μl 10×VentR（exo-）测序缓冲液（4）1 μ