植物组织制备基因组 DNA 实验

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

利用基因组DNA较长的特性，可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。在提取过程中，染色体会发生机械断裂，产生大小不同的片段，因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作，如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓，以保证得到较长的DNA。

来源：丁香实验

操作方法

氯化铯法

1. 收取10~50 g 新鲜的植物组织。 2. 植物组织用冷的无菌水洗涤、吸干，放人液氮中冻结，用研钵和研杵研成细粉。 3. 将冻结的细粉放入250 ml 的离心瓶中，立即加入抽提缓冲液约每克植物5~10 ml，轻轻搅拌混匀。 4. 加入十二烷基肌氨酸钠使终浓度达1%，于温育1~2 h。 5. 用JA-14转子4℃，5 500 g 离心10min 保留上清，必

CTAB法

1. 在所需量的CTAB抽提液中加入2-巯基乙醇，使终浓度达2%。将此溶液及CTAB溶液加热至65℃。 2. 用液氮（-196℃）或干冰（-78℃）冷却粉碎器/匀浆器，将植物组织粉碎成为细粉。 3. 将冷冻的组织转移到一个抗有机溶剂的试管或烧杯中。 4. 往粉碎的组织中加人预热的2-ME/CTAB，混合使之充分湿润，于65℃温育10~60 min，混匀。