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T4 DNA 聚合酶实验

T4 DNA 聚合酶具依赖人为模板的聚合酶活性，同时具有对单链、双链DNA的3’到5’端的外切酶活性，缺少5’到3’端的外切酶活性。

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用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子

T4RNA 连接酶已经用来生成很多位点特异修饰的 RNA，尤其是寡核苷酸修饰和用反义密码 tRNA 修饰的 RNA。另外，T4RNA 连接酶还可用于 RNA/DNA 分子内/分子间连接、甲链寡脱氧核苷酸的连接、克隆全长 cDNA 及将非天然氨基酸掺入蛋白分子中。

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T4 DNA Ligase

T4 DNA Ligase 即 T4 DNA 连接酶，可以催化粘端或平端双链 DNA 或 RNA 的 5’-P 末端和 3’-OH 末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需 ATP 作为辅助因子。

操作方法所属实验：质粒构建技术

T4 DNA聚合酶

一、50 μl 反应体积：（1）50 mmol/l Tris·Cl，pH8.0（2）5 mmol/l MgCl2（3）5mmol/l DTT（4）100 μmol/l 4dNTP混合液（5）50 μg/ml BSA（6）0.1 U T4DNA聚合酶（7）2 μg DNA（8）11℃温育20 min，加入2 μl 0.5 mol/l EDTA或75℃加热10 min以终止反应。（9）反应体枳、4种dNTp的浓度、反应温度可依具体应用而变。二、dNTp浓度的效应 1. 高浓度

操作方法所属实验：T4 DNA 聚合酶实验

问T4 DNA连接酶错用成Gibson酶

土井挞克树

不可以了，重新连接吧，这种情况不能用了

实验问答2 回答671 围观

问怎么用T4 RNA 连接酶链接RNA分子呢？

lzy必有我师

(二）操作方法1) 进行 RNA 与 RNA 分子连接的反应体系如下：供体 (donor)RNA 100-500ng受体 (acceptor)RNA 250ng10XT4RNA 连接酶缓冲液 4ulRNasin 核酸酶抑制剂 (40U/ul

实验问答1 回答580 围观

7- 3D Assay in Matrigel : S1, T4-2, T4-2R

up pellet.? S1 cells 1.0 x 106 cells/1.2 ml matrigel T4-2. 0.7 x 106 cells/1.2 ml matrigel. T4-2 +AIIBII 0.7 x 106 cells/1.2 ml matrigel

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【求助】寻找αT3-1，LβT2 或LβT4 细胞系

一光年最近要做生殖的细胞方面的实验，前期一直用在垂体细胞原代培养，但是一直困扰没有促性腺激素细胞系，但是在网络中搜索，发现老外的文章中经常提到αT3-1，LβT2 或LβT4细胞系，在ATCC等知名的细胞库也未发现这些细胞系，不知道各位高手指点在哪里可以找到这几种细胞系？不甚感激！！ veimojie 我一直也在做这方面的研究什么地方能有啊？ banana_smile 我也想做这方

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T4 DNA 连接酶连接 RNA 分子

T4 DNA 连接酶可将双链复合物缺刻连接，其中包括 RNA-DNA 杂合链及 RNA-RNA 杂合链。

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用 T4 噬菌体 DNA 聚合酶标记双链 DNA 的 3'端

本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

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用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子

一材料与设备1)10XT4RNA 连接酶缓冲液：50 mmol/LTris (pH7,8)，l0 mmol/L MgCl2，5 mmol/LDTT,1 mmol/L ATP2) 无核酸酶的水3)FEG(polyethyleneglycol)40%4)RNA 酶抑制剂5)T4RNA 连接酶6) 供体（donor)RNA7) 受体（acceptor)RNA(二）操作方法1) 进行 RNA 与 RNA 分子连接的反应体系如下：供体 (donor)RNA

操作方法所属实验：用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子

用 T4 DNA连接酶连接RNA分子

一材料与设备1)T4DNA 连接酶2)T4 多聚核酸激酶3)RNA 供体4) 受体5) 寡核苷酸 cDNA 模板6)10X 连接缓冲液：500 mmol/LTris-HCl(pH7.5)，100 mmol/LMgCl2，200 mmol/LDTT,0.5 mg/mLBSA(适用 NewEngtandBiolabs 连接酶）或 660 mmol/LTris-HCl(pH7.6)，66 mmol/LMgCl2,lOOmmol/LDTT(适用于 Amersham/USB 连接酶）

操作方法所属实验： T4 DNA 连接酶连接 RNA 分子

问有谁用过生工的T4DNA连接酶嘛！

汤姆卜丽波

没连上，你可以把质粒稀释一下然后再加，我觉得这个摩尔比还没达到

实验问答3 回答516 围观

问Gibson酶能用作T4 DNA酶吗

申东熙老伯

应该是不可以的，这两种酶连接原理不一样。

实验问答3 回答451 围观

大鼠甲状腺素(T4)酶联免疫分析

大鼠甲状腺素 (T4) 酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中甲状腺素(T4) 的含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠甲状腺素 (T4) 水平。用纯化的大鼠甲状腺素 (T4) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入甲状腺素 (T4) 抗原，再与 HRP 标记的甲状腺素 (T4) 抗体

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Ligation of DNA with T4 DNA Ligase

recombination and DNA synthesis. DNA ligase from E. coli is a polypeptide with a molecular weight of 74,000 and is NAD-dependent. T4 DNA ligase is the product of gene 30 of the T4 phage, has a molecular weight of 68,000, and is ATP-dependent. Both enzymes

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RNA 放射性标记

转录过程中的 RNA 分子内标记，转录后利用 T4 多核苷酸激酶的 RNA5＇端标记和利用 T4RNA 连接酶的 RNA3＇端标记。

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去磷酸化的平端或 5' 凹端 DNA 分子的磷酸化

在 T4 多核苷酸激酶的正向反应中，带有平端、5' 凹端或分子内切口的 DNA 底物比 5' 突出端的分子标记效率低。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

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用T4噬菌体DNA聚合酶标记双链DNA的3'端

一、材料1. 缓冲液和溶液醋酸氨（10 mol/L)乙醇酚：氯仿（1:1，V/V)2. 酶和缓冲液适当的限制性内切核酸酶T4 噬菌体 DNA 聚合酶10X T4 噬菌体 DNA 聚合酶缓冲液3. 核酸和寡核苷酸含三种来标记的 dNTP 溶液，浓度各为 2 mmol/L含一种未标记的浓度为 2 mmol/L 的 dNTP 的溶液模板 DNA ( 0.1~5 μg )4. 放射性复合物[α-32P] dNTP ( 10 mCi/ml，比活性为 800~3000 Ci/mmol）5. 专用

操作方法所属实验：用 T4 噬菌体 DNA 聚合酶标记双链 DNA 的 3'端

目的基因的亚克隆

补平，然后再以平末端连接。二、利用T4 DNA连接酶进行目的DNA片段和载体的体外连接1.连接要求和结果带有相同末端（平端或粘端）的外源DNA片段必须克隆到具有匹配末端的线性质粒载体中，但是在连接反应时，外源DNA和质粒都可能发生环化，也有可能形成串联寡聚物。因此，必须仔细调整连接反应中两个DNA 的浓度，以便使“正确”连接产物的数量达到最佳水平，此外还常常使用碱性磷酸酶去除5’磷酸基团以抑制载体DNA的自身环化。利用T4 DNA连接酶进行目的DNA片段和载体的体外连接反应，也就是在双链DNA 5’磷酸

操作方法所属实验：目的基因的亚克隆