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代谢组学样品的处理注意事项及质控

相关实验:实质等同性(代谢组学)实验

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实验室小助理夏奇

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3 个回答

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loveliufudan

有帮助

在代谢组学研究中,样品处理的注意事项和质控措施对于数据质量和可靠性至关重要。以下是一些常见的样品处理注意事项和质控措施:

1. 样品采集:

样品采集要注意避免污染和交叉污染。使用无菌技术和消毒方法,确保样品采集器具和容器的无菌和洁净。

采集样品时注意避免氧化、光照和温度变化等可能导致代谢物分解或变化的因素。

2. 样品存储:

样品在采集后应尽快处理或冷藏储存,以防止代谢物的降解和变化。

样品的冻存和储存条件应符合要求,如低温(通常为-80℃)和避光。

3. 样品前处理:

样品前处理的方法应根据研究目的和样品类型进行优化,以最大程度地提取和保存代谢物。

针对不同样品类型,如血清、尿液、组织等,可能需要不同的前处理步骤,如蛋白质去除、离心、固相萃取、溶剂萃取等。

4. 质控样品:

引入质控样品进行数据质控。质控样品可以是已知浓度的标准物质,用于监控仪器性能和实验过程中的变异性。

质控样品应与研究样品一起进行处理和分析,并在实验中设置合适的重复和间隔。

5. 内部标准物质:

引入内部标准物质用于数据校正和定量分析,以确保数据的准确性和可靠性。

内部标准物质应与待测代谢物具有类似的特性,并在样品处理和分析过程中添加。

6. 批次效应:

为了控制批次效应,样品在实验中的处理顺序和分析顺序应随机化。

对于大样本量的研究,可以将样品分为多个批次,并在每个批次中包含质控样品和重复样品。

7. 重复性和技术复制:

进行适当的重复和技术复制,以评估实验的重复性和数据的稳定性。重复性和技术复制可以包括样品的重复采集、处理和分析,以及仪器的重复测量。

重复采集样品可以评估样品采集过程中的变异性和样品稳定性。

技术复制包括对同一样品进行多次处理和分析,以评估仪器的重复性和分析过程中的变异性。

8. 质量控制:

建立质量控制指标和标准操作程序,以确保实验的质量和可靠性。

定期进行仪器校准、标准曲线建立和系统性能评估。

监控实验中的峰漂移、信号强度、峰形对称性等指标,以及数据处理过程中的一致性和准确性。

9. 数据处理和标准化:

使用合适的数据处理方法和统计学技术对代谢组数据进行处理和分析,如归一化、去趋势、样品聚类等。

根据研究设计和统计要求,对数据进行标准化,以消除样品间的差异性。

以上是一些常见的样品处理注意事项和质控措施。在代谢组学研究中,质量控制是确保数据质量和结果可靠性的关键步骤,应根据具体实验设计和研究目的进行合理的选择和实施。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

代谢组学样品处理注意事项:

一要求七要素”原则

一要求

减少人为的污染,降解和修饰。

七要素

一致:实验组与对照组取样一致性,如组织样本组织块的大小、取样部位,血液样本性别年龄的匹配,尿液样本取样时间等;

除杂:去除与实验无关的杂质,如动物组织去血、植物组织去除泥土等污染物、菌体及细胞去除培养基等,推荐使用PBS缓冲液或者生理盐水,吸水纸吸干残留液体;

低温:样本预处理尽量低温,可以在冰上进行杂质去除和分装的操作,低温保存,通常保存在-80℃冰箱;

分装:根据实验用量进行分装,避免反复冻融;

迅速:样本收集,制备,存储和运输应尽可能的迅速,压缩样本采集到正式实验的时间;

标记:用优质的记号笔清晰的标记好样品名称,以免混淆样本;

包装:建议使用进口的离心管、冻存管收集样本,以防在运输和操作过程中样本管破裂以及聚合物对样本造成污染,植物样本可以用锡箔纸包装,锡箔纸外面套一个自封袋以免运输过程中样本洒落。

 

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waterstech

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需要针对不同生物样品不同目标化合物进行方法优化,做好SOP

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