SYBR GReen I和PI染色 显微镜制片 详细操作过程

SYBR greenⅠ是荧光定量RT-qpcr的染料，提取RNA后先经逆转录得到cDNA,再按照不同的酶体系加入适量的cDNA、酶、SYBR greenⅠ进行pcr检测。

SYBR Green I预染色方法

1、该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。 2、工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的SYBR GreenⅠ稀释100倍，即为SYBR GreenⅠ工作液。SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。 3、制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。 4、样品染色：向分析样品中加入SYBR GreenⅠ工作液和载样缓冲液，室温放置10分钟，使SYBR GreenⅠ与样品中DNA充分结合。SYBR GreenⅠ工作液加入量为总上样量的1/10。 5、DNA Marker染色：将5μL DNA Marker和5μL DNA Marker稀释液和1-2μL SYBR GreenⅠ工作液混匀，室温放置5分钟，使SYBR GreenⅠ与DNA充分结合。 6、上样、电泳：按常规操作。

SYBR greenⅠ是荧光定量pcr的染料，提取rna后先经逆转录得到rcDNA,再按照不同的酶体系加入适量的rcDNA、酶、SYBR greenⅠ进行pcr检测。

SYBR Green染色是一种常用的核酸荧光染色方法,与HE染色不同,它通过与双链DNA特异性结合来探测细胞中的DNA。SYBR Green染色细胞制片的详细操作流程如下:

1. 取待检细胞,制备细胞爬片,固定于载玻片上。常用4%多聚甲醛固定10-15分钟。

2. 用PBS缓冲液洗涤2次,每次5分钟。

3. 在无光条件下,加入适量含有SYBR Green 的染色液(商品SYBR Green可直接稀释使用),盖上盖玻片。避光染色5-10分钟。

4. 用PBS洗涤载玻片2次,每次5分钟,洗去未结合的SYBR Green。

5. 在荧光镜下检测,使用FITC滤光片(蓝色激发光),可观察到绿色荧光表示DNA的存在。

6. 最后可以用中性树脂封片,长期保存。

SYBR Green染色具有操作简便、快速、灵敏度高的优点,可用于各类细胞和组织标本的DNA染色。与HE染色不同,它通过荧光标记DNA,不需复杂的组织结构判别,可快速定量检测细胞中的DNA。两者为常用的细胞病理学检测方法。