SIM成像时 1、荧光淬灭太快如何减少荧光淬灭，2、活细胞成像时SIM图像背景荧光太高如何调整。3、SIM成像如何调整曝光时间与

1.保持避光。

2.减少曝光时间减弱光源强度。

3.降低样品浓度。

荧光淬灭太快可以试一试以下两个办法：

1.调整激发光,既然淬灭厉害,先减弱激发光强度,可以试试插入减光片减弱强度、关小视场光阑至CCD外沿减小照射面积、关小孔径光阑减小光通量,直到目镜下刚好能看清样品;

2.物镜,有条件可以换个数值孔径更大,不带相差功能,通透率高的物镜,这个很关键;不一定要Plan Apo的,图像越是完美的物镜通透率不一定高;

---最好先分析其中的原因。首先可能信号弱，信噪比差，所以提高了激光强度，增加了照射次数，所以容易淬灭。背景高也有可能是信号弱显得背景高。其次如果为了减少荧光淬灭，可以加抗淬灭剂，也建议摸索荧光抗体浓度，浓度太高也会引起自淬灭。如果背景荧光过高，可以尝试使用Image-iT™ FX 信号增强剂（货号为 I36933，R37107）降低非特异性荧光（背景）。更多SIM成像问题，建议联系仪器的技术支持。