【求助】双荧光素酶实验结果和荧光定量结果相反

郭Bing鱼

2022-07-20

在24孔板中转染目的基因700ng，检测基因200ng，海肾内参SV40 50ng，转染36~48小时之间收样，每次都是萤火虫值比海肾小，用萤火虫/海肾算出来的结果与预期结果相反，荧光定量是可以上调这个基因。我的预期结果也是可以上调，怎么结果刚好相反了。有没有人遇到过这种情况的？请求大神指导一下

Eason老歌迷

2022-07-22

有帮助

不应该啊，我觉得可能是你的实验操作有问题。双荧光素酶报告实验还是很准确的，采用萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶组成，实验过程中萤火虫荧光素酶与基因表达的特定实验条件有关，海肾荧光素酶用来做转染的内参，以校正不同样品之间转染的转染效率。

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