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切片一般是横着切,切片及染色肾组织要求为未经任何处理的新鲜组织,应立即送入恒温冷冻切片机(cryostat)内,将肾组织放置于金属托上,周围添加OCt compound 包埋剂(如无包埋剂,滴加数滴生理盐水亦可),迅速冷冻至-20℃,切出3~5μm厚的冰冻切片附贴于载玻片上,至少需切10张以上备用。
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想要观察肾小管上皮细胞,需要先对肾脏进行适当的处理和包埋,以下是一般的步骤:
取得肾脏组织样本。可以选择小鼠、大鼠或其他动物,也可以使用人类组织样本。
对组织进行固定。使用适当的固定剂(例如4%的多聚甲醛)进行固定,保证细胞结构不被破坏。时间通常为数小时到一天。
切割组织。用组织切片机将固定的组织切成合适的薄片,通常为5-10微米。切片可以是横向的,即将肾脏从中央切割,使得切片显示出横截面。也可以是纵向的,即将肾脏从侧面切割,使得切片显示出纵截面。
包埋。将切片放入适当的包埋剂中,通常为蜡或树脂。横向切片通常被纵向包埋,而纵向切片通常被横向包埋。包埋有助于保护切片和组织结构,使其更容易切割和染色。
制备玻片。用切片机将包埋后的切片切成更薄的薄片,通常为3-5微米。将薄片放置在玻璃片上,用适当的染色方法染色,例如荧光染色。
对于免疫荧光,你需要选择适当的抗体对肾小管上皮细胞进行染色。染色时,可以使用适当的细胞核染色剂来标记细胞核,以帮助识别细胞结构。
毛利小五郎的徒弟
肾小管上皮一般是观察纵切面,可以有细胞的横切面。