EAE模型三批老是失败

如果连续多次失败，可能需要考虑以下因素和改进措施：

1. 抗原选择：EAE模型通常使用小鼠或大鼠的脑脊髓组织或相应的蛋白质（如脱髓鞘蛋白质）作为抗原。确保你选择的抗原具有足够的免疫原性，并经过适当的处理和储存。此外，还要考虑抗原的纯度和质量。

2. 免疫佐剂选择：佐剂的选择对于EAE模型的成功建立至关重要。强烈建议使用常见的佐剂，如完全弗氏佐剂（Complete Freund's Adjuvant，CFA）或其变体，以增强免疫反应。在使用佐剂时，遵循操作指南，并确保佐剂的质量和储存条件。

3. 动物品系和性别选择：不同的动物品系和性别对于EAE模型的敏感性可能存在差异。确保选择合适的品系和性别，以获得更好的模型建立效果。此外，年龄也是一个重要的因素，通常选择较年轻的小鼠进行实验。

4. 注射剂量和方案：在注射抗原或免疫佐剂时，确保剂量和注射方案准确无误。剂量过高或过低可能会影响模型的建立。参考相关文献和方法优化实验方案。

5. 环境条件和动物护理：良好的环境条件和动物护理是成功建立EAE模型的重要因素。维持稳定的环境温度、湿度和光照条件，并确保动物得到充足的饮食和水源。同时，严格遵守动物伦理和实验室操作规范。

7. 检查实验步骤和数据分析：仔细检查实验步骤和数据分析过程，确保操作的准确性和一致性。如果可能，重新复查实验步骤，确保没有遗漏或

可以按照以下步骤造模：

1.动物选择 由于不同品种动物或同一品种不同品系动物存在着不同的遗传背景，表现为免疫系统的T细胞克隆株对自身抗原的反应性不同。因此，在选择动物时需要寻找EAE模型的敏感动物，如SJL/J、B10PL、PL/J小鼠，Lewis大鼠、豚鼠及家兔等都是良好的EAE敏感动物。

(1)抗原和抗原乳剂的制备和免疫途径 常用的致敏抗原有髓鞘碱性蛋白(MBP)、脂蛋白(PLP)或其多肽片段(如MBP peptide 89-101)，髓鞘素(myelin)、脑脊髓组织匀浆(brain spinal cordhomogenous, BSCH)也可作为致敏抗原。抗原的提取方法可参考文献。提取的抗原需和福氏完全佐剂(FCA)制成抗原乳剂后用于致敏动物。不同实验室所选致敏用抗原及佐剂中分支结核菌蛋白浓度有所差别，但它对动物发病率至关重要。MBP抗原和结核菌素常用量为每只小鼠50～1000μg。

免疫抗原和佐剂剂量在一定范围内随浓度增高使动物发病率增加，于FCA中加入百日咳杆菌[每只大鼠(1×100000)～(1×1000000)个]可明显提高EAE的发病程度，可使EAE敏感性弱的Wistar大鼠变得敏感。抗原佐剂为非特异性免疫增强剂，它可改变抗原的物理性状，增加抗原在体内的储留时间，刺激抗原提呈细胞、淋巴细胞，从而增强和扩大免疫应答效果。动物一般经l次皮下或脚垫注射抗原后9～11d即开始发病，反应严重的动物可死亡，未死亡者一般在注射抗原后3周开始逐渐恢复。

(2)动物发病程度的判定标准 通常根据Knono等提出的标准，分为5级。1级：动物尾部无力；2级：尾部无力加肢体无力；3级：肢体轻度麻痹；4级：肢体严重麻痹，被动翻身后不能复原；5级：濒死状态。

具体造模步骤：

一、实验材料

MOG35-55

CFA

百日咳素

二、实验方法

1、抗原乳化：1mg/ml的CFA和1mg/ml的MOG35-55混合乳化，利用三通管排出注射器中的空气，冰上来回交替推动活塞 30 min，抗原呈完全乳化状态。

（也可使用高速搅拌器，4℃搅拌2min，3-5次）

2、完全乳化的抗原使用1 ml注射器分装，排除内空气后保存于冰上。

3、百日咳素（PTX）的稀释：用 1×PBS以 1:25稀释 PTX至终浓度2ug/ml。

4、小鼠尾静脉（i.v.）注射PTX，100ul/只小鼠 。

5、小鼠气麻后，用酒精棉球消毒小鼠前肢肩胛骨与后扇部位的皮肤，皮下注射 MOG35-55抗原乳化液于该四点处，每处 50μl。

7、48 h后，每只小鼠再次尾静脉注射 100 μl PTX。

8、模型诱导首天记为Day 0，每天统计小鼠体重，观察评分 。