LMSUY3
用不同浓度tnf-α(10 20 25 40 50 80ng/ml都试过了)诱导hacat 细胞,干预24h 没有增殖,感觉还有点抑制了。造模造不出来😭😭求大佬指点.(细胞铺板密度,10000/孔 5000/孔都试过)
毛利小五郎的徒弟
早期先降低肿瘤坏死因子的浓度,然后后期再增加
loveliufudan
对于构建HaCaT细胞的炎症模型,以下是一些建议和可能的考虑因素:
1. 细胞状态和特性:HaCaT细胞是一种人体表皮角质样上皮细胞系,具有一定的分化状态。请确保您的细胞在培养过程中保持良好的状态,例如培养基的适当配方、培养温度和细胞密度的控制等。
2. TNF-α浓度选择:TNF-α是一种重要的炎症介质,但对于不同细胞类型,对TNF-α的敏感性可能存在差异。您已经尝试了不同的浓度范围,但没有观察到增殖或合适的炎症反应。在选择TNF-α浓度时,可以参考相关文献或先前的实验,了解在HaCaT细胞中使用TNF-α的常见浓度范围。
3. 处理时间:TNF-α诱导炎症反应通常需要一定的时间。您提到的干预时间为24小时,这可能对于观察到明显的细胞增殖或炎症反应可能还不够长。您可以考虑延长处理时间,例如48小时或更长,以允许足够的时间发生细胞反应。
4. 细胞密度和培养条件:细胞密度和培养条件也可能对细胞的反应产生影响。您已经尝试了不同的细胞密度,但仍然没有观察到预期的结果。在细胞培养过程中,注意使用适当的培养基和培养条件,并遵循实验室的标准操作规程。
5. 细胞响应检测方法:确保选择适当的检测方法来评估细胞的增殖和炎症反应。除了细胞计数之外,可以考虑使用细胞增殖检测试剂(如CCK-8)以及检测炎症标记物(如细胞因子分泌、蛋白质表达等)来评估细胞的响应。
6. 副作用:在研究过程中,还要注意可能存在的药物副作用或细胞毒性。尽量选择细胞所能容忍的适当浓度范围,并进行对照实验以评估细胞的生存和健康状态。
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