科研路上的我
想请教一下葡萄膜炎C57小鼠造模的相关经验,以下是我造模的具体方法(根据文献),免疫14天后,裂隙灯观察EAU小鼠的眼睛葡萄膜炎症状很轻,仅仅处于角膜水肿的状态,但是脾脏出现了明显的肥大。请教一下为什么眼睛的葡萄膜炎症状这么轻?如果是药物没有吸收的话,但脾脏已经很明显肥大了,说明还是吸收了的。我现在在想是IRBP溶解的不够充分吗?希望做过的同学给点意见?
1. IRBP 651-670 多肽片段(序列为LAQGAYRTAVDLESLASQLT)溶解于PBS中,充分混匀,制备为 3 mg/mL 的抗原溶液。
2. 含有 5 mg 灭活的结核分支杆菌(mycobacterium tuberculosis ,TB)H37Ra(Difco,USA)的弗式完全佐剂(Freund's complete adjuvant,CFA)用非弗式完全佐剂(Freund incomplete adjuvant,FIA)稀释成含有TBH37Ra 浓度为 2.5 mg/mL的 CFA
3. 5μg 百日咳毒素(Pertussis toxin ,PTX)(Sigma,USA)溶于1ml 磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer solution,PBS)中,制备5 μg/ml 的溶液。
4. 将 8.3 mL IRBP 651-670 溶液(C: 3 mg/mL),以及 8.3 mL TB H37Ra 浓度为 5 mg/ml 的 CFA,充分混合成乳液,取 200 uL(相当含IRBP 651-670 300 μg)乳化后的液体免疫于小鼠皮下(尾根部100μl,大腿外侧各50 μl,上肢腋窝处)。
5. 分别于造模前 30 min 和造模后两天,小鼠腹腔注射 100 μl PTX(5 μg/ml)。
土井挞克树
脾大可能是免疫激活的原因,溶解度低可以换溶剂。
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