发酵新手，举步维艰请求支援。 BL21(DE3)，5L发酵罐，实际发酵体积3L
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3L培养基配方如下:
酵母粉:72g，蛋白胨:36g，磷酸氢二钾:37.5g，磷酸二氢钾:6.9g，甘油:75g
1Mol硫酸镁母液:12.5ml，4.5ml kana
补料培养基差不多，并且我的发酵实验还不涉及补料。。。
种子液200ml，接种时od0.9
发酵温度37℃，ph7（发酵罐自动控制），初始转速500rpm
接种后溶氧缓慢下降，大概2.5h后降到15，期间有少量多次的补碱，开搅拌关联后，溶氧逐渐上升，正常会维持在30-40之间（因为开了关联），但是本次发酵DO一直回弹到103左右，并且ph上升开始补酸，我猜测应该是有自溶现象，发酵液出现泡沫，并且味道也有些反常。
该发酵实验本人已尝试七八次，每次发酵的1-3h都很正常，都是3-5h之间出现问题，而且都是同样的问题（ph上升，开始补酸，od不涨甚至下降），但是前面几次疑似自溶的时候溶氧都没回弹，就是0溶氧，我当时猜测发酵液中的菌可能一边自溶一边生长，这次直接溶氧回弹起来了。实在搞不懂哪里出了问题，顺便补一句，摇瓶发酵验证是没问题的，但是发酵就是失败。
查了挺多资料，大概整理了几种可能性。
1.培养基碳氮比不合理（基本可以排除，因为该发酵实验以前是验证成功过的，并且效果不错。3L发酵液收300g左右湿菌泥）
2.噬菌体污染（也不太可能，正常噬菌体污染的话，摇瓶验证也会受到影响，因为都在同一个实验室，而且之前还出现过溶氧不回弹的，姑且称之为缓慢自溶的现象，个人认为噬箘体od肯定是剧烈的下降，但是实际过程未出现该情况）
3.染菌（可能性大，但是操作的规范性已经做到我认知里的极限了，不知道如何避免）
4.原始甘油菌活力差，或是有污染（可能性大，涂报挑单克隆或能解决？）
请各路发酵行业的专家，以及师兄师姐们帮我分析下。有没有可能是其他因素导致的异常，以及有哪些可能改进，或是需要注意的地方。
救救孩子
4 个回答
刷了遗忘两千风
你好，我也遇到过类似情况，推测是菌体活力不够，建议重新转化后接种子液。我的培养基和你几乎是一样的成分，但是甘油浓度是5g/L，后续补料甘油。我最开始遇到这种情况的时候用的5 L发酵罐（1 L发酵液），诱导后菌体自溶产生气泡，溶氧快速上升，最后接近100%。重新做转化后接种，就没有这种情况了。但是做3 L发酵的时候又菌体自溶了。因此该建议仅供参考。染菌可能性不大，因为染菌后杂菌可能会继续活着，溶氧不至于上升。我用发酵液做了噬菌体检测实验（双层平板法检测噬菌斑），没发现有噬菌体。如果解决的话后续我们可以深入交流一下。
smouzh
先把发酵罐彻底清洗排除芽孢等的干扰，能拆就拆了用0.5碱泡着，然后装着0.5碱去灭菌锅灭菌。不能拆就直接用碱90℃泡30-60min然后冲洗干净。
你这个可能是试剂或者水质出现问题了。建议看一下菌体情况和以前有没有区别比如变粘稠，或者最终产物有无区别
sswei
罐内含有杂菌，则会导致以下两种结果：1、会对发酵所需的微生物造成不可挽回的毁灭性打击，导致发酵所需的微生物大面积死亡，从而使整个发酵实验以失败告终。2、不会对发酵所需的微生物造成危害，但是其会在发酵过程中与发酵所需的微生物抢夺养分，从而在一定程度上抑制了微生物的正常生长繁殖，久而久之，还是会导致实验走向失败。
如果使用的消泡剂或者酸碱对菌体有害，不仅无法对实验起到正面的促进效果，反而会对其造成不好的影响，更有甚者则会导致实验的失败。
毛利小五郎的徒弟
还是染菌的可能性大，染菌会造成发酵体积减少
