发酵新手，举步维艰请求支援。 BL21(DE3)，5L发酵罐，实际发酵体积3L

3L培养基配方如下:

酵母粉:72g，蛋白胨:36g，磷酸氢二钾:37.5g，磷酸二氢钾:6.9g，甘油:75g

1Mol硫酸镁母液:12.5ml，4.5ml kana

补料培养基差不多，并且我的发酵实验还不涉及补料。。。

种子液200ml，接种时od0.9

发酵温度37℃，ph7（发酵罐自动控制），初始转速500rpm

接种后溶氧缓慢下降，大概2.5h后降到15，期间有少量多次的补碱，开搅拌关联后，溶氧逐渐上升，正常会维持在30-40之间（因为开了关联），但是本次发酵DO一直回弹到103左右，并且ph上升开始补酸，我猜测应该是有自溶现象，发酵液出现泡沫，并且味道也有些反常。

该发酵实验本人已尝试七八次，每次发酵的1-3h都很正常，都是3-5h之间出现问题，而且都是同样的问题（ph上升，开始补酸，od不涨甚至下降），但是前面几次疑似自溶的时候溶氧都没回弹，就是0溶氧，我当时猜测发酵液中的菌可能一边自溶一边生长，这次直接溶氧回弹起来了。实在搞不懂哪里出了问题，顺便补一句，摇瓶发酵验证是没问题的，但是发酵就是失败。

查了挺多资料，大概整理了几种可能性。

1.培养基碳氮比不合理（基本可以排除，因为该发酵实验以前是验证成功过的，并且效果不错。3L发酵液收300g左右湿菌泥）

2.噬菌体污染（也不太可能，正常噬菌体污染的话，摇瓶验证也会受到影响，因为都在同一个实验室，而且之前还出现过溶氧不回弹的，姑且称之为缓慢自溶的现象，个人认为噬箘体od肯定是剧烈的下降，但是实际过程未出现该情况）

3.染菌（可能性大，但是操作的规范性已经做到我认知里的极限了，不知道如何避免）

4.原始甘油菌活力差，或是有污染（可能性大，涂报挑单克隆或能解决？）

 

请各路发酵行业的专家，以及师兄师姐们帮我分析下。有没有可能是其他因素导致的异常，以及有哪些可能改进，或是需要注意的地方。

救救孩子