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氨基转移反应的定性鉴定

相关实验:氨基转移反应的定性鉴定

最新修订时间:

原理

氨基移换酶也称转氨酶,它能催化α-氨基酸的氨基与α-酮酸的α-酮基互换,这种作用称为氨基移换作用。它在生物体内蛋白质的合成与分解等中间代谢中,在糖、脂肪、蛋白质三类物质代谢的相互联系、相互转化上,都起着很重要的作用。任何一种氨基酸进行转氨作用时,都由其专一的转氨酶催化。它们的最适pH接近7.4。在各种转氨酶中,以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶(简称谷草转氨酶、GOT)及谷氨酸-丙酮酸转氨酶(简称谷丙转氨酶、GPT)活力最强。

材料与仪器


磷酸缓冲液 谷氨酸溶液 丙酮酸溶液 碳酸氢钾溶液 碘乙酸溶液 三氯醋酸溶液 丙氨酸溶液 标准谷氨酸溶液 水合茚三酮乙醇溶液 酚溶剂
解剖器具 离心机 恒温水浴 干燥箱 台秤 层析系统

步骤

将兔击晕,迅速解剖,取出肝脏,在低温条件下剪碎。称取匀浆后,离心取上清液,即为制备的酶液。体外氨基移换反应。纸上层析法检查每人4个点(标准丙氨酸溶液、标准谷氨酸溶液、对照上清液、样品上清液)。点样放入层析罩内。用被酚所饱和的水溶液,平衡后,用带小漏斗的玻璃管从层析罩上加饱合酚试剂25ml于层析缸内。然后,立即盖紧塞子,当溶剂前沿达到距滤纸上端约2.5cm处,取出滤纸,晾干或吹干,以除去酚溶剂,喷洒0.1%茚三酮乙醇溶液,放入烘箱中显色氨基酸与茚三酮反应,在滤纸上呈现紫红色斑点。

注意事项

1、取动物新鲜组织制备酶液,防止酶失活。


2、加碘乙酸抑制酶解作用。

来源:丁香实验

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