原理
氨基移换酶也称转氨酶,它能催化α-氨基酸的氨基与α-酮酸的α-酮基互换,这种作用称为氨基移换作用。它在生物体内蛋白质的合成与分解等中间代谢中,在糖、脂肪、蛋白质三类物质代谢的相互联系、相互转化上,都起着很重要的作用。任何一种氨基酸进行转氨作用时,都由其专一的转氨酶催化。它们的最适pH接近7.4。在各种转氨酶中,以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶(简称谷草转氨酶、GOT)及谷氨酸-丙酮酸转氨酶(简称谷丙转氨酶、GPT)活力最强。
材料与仪器
兔
磷酸缓冲液 谷氨酸溶液 丙酮酸溶液 碳酸氢钾溶液 碘乙酸溶液 三氯醋酸溶液 丙氨酸溶液 标准谷氨酸溶液 水合茚三酮乙醇溶液 酚溶剂
解剖器具 离心机 恒温水浴 干燥箱 台秤 层析系统
磷酸缓冲液 谷氨酸溶液 丙酮酸溶液 碳酸氢钾溶液 碘乙酸溶液 三氯醋酸溶液 丙氨酸溶液 标准谷氨酸溶液 水合茚三酮乙醇溶液 酚溶剂
解剖器具 离心机 恒温水浴 干燥箱 台秤 层析系统
步骤
将兔击晕,迅速解剖,取出肝脏,在低温条件下剪碎。称取匀浆后,离心取上清液,即为制备的酶液。体外氨基移换反应。纸上层析法检查每人4个点(标准丙氨酸溶液、标准谷氨酸溶液、对照上清液、样品上清液)。点样放入层析罩内。用被酚所饱和的水溶液,平衡后,用带小漏斗的玻璃管从层析罩上加饱合酚试剂25ml于层析缸内。然后,立即盖紧塞子,当溶剂前沿达到距滤纸上端约2.5cm处,取出滤纸,晾干或吹干,以除去酚溶剂,喷洒0.1%茚三酮乙醇溶液,放入烘箱中显色氨基酸与茚三酮反应,在滤纸上呈现紫红色斑点。
注意事项
1、取动物新鲜组织制备酶液,防止酶失活。
2、加碘乙酸抑制酶解作用。
来源:丁香实验