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PI染色用流式检测细胞周期结果有杂峰,为什么?

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dxy_r8ysszr4

问题:

1)如图有杂峰,什么原因,如何避免?

2)PI染料法步骤中,乙醇固定或PBS清洗时,离心后看不到沉淀,为什么?细胞样品收的是六孔板

3)做流式的细胞用胰酶还是细胞刮?哪种方法对细胞损伤小?胰酶消化时间不好把控,有时候消化不下来

4)收集细胞量多少比较合适?两万还是三万

5)G2峰曲线不是很圆滑,怎么解决?

恳请大佬们提出宝贵建议,祝实验顺利,谢谢!

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3 个回答

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huarenqiang5

有帮助

能用胰酶尽量用胰酶,胰酶对细胞损伤比较大,应用时需要把握好时间就行。而刮刀对细胞损害比较大一般不建议选用。

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土井挞克树

有帮助

有杂峰可能考虑杂质污染,纯化一下样本。

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loveliufudan

有帮助

1.流式染色的杂峰可能是由于细胞偏离生长周期或者存在细胞凋亡,导致细胞周期评估不准确。为了避免杂峰,可以使用高质量细胞样本,并在细胞培养过程中保持细胞生长条件的稳定。

2.P1染料法中乙醇固定或PBS清洗时,看不到沉淀的原因可能是因为细胞样品太少或者细胞在清洗过程中被损伤。为了避免这种情况,可以增加细胞样本量,并减少离心速度。

3.在做流式分析的细胞消化时,胰酶是一种常用的消化方法,但是胰酶消化时间不好控制,并且可能对细胞造成损伤。因此,刮胎法更适合于细胞消化,并且损伤较小。

4.收集细胞量的合适数量取决于实验要求和所使用的流式仪器,通常情况下2万至3万个细胞是一个较合适的样本量。

5.G2峰曲线不圆滑的原因可能是细胞周期分布不均匀或者存在细胞凋亡。为了解决这个问题,可以使用高质量细胞样本,并在细胞培养过程中保持细胞生长条

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