求助心肌细胞动作电位HEKA 程序

实验前准备：打开总电源及稳压电源，打开电脑、放大器，并开启程序软件patchmaster，新建数据文档并准备开始试验;用P97微电极拉制仪拉制玻璃电极若干备用;检查减震台的减震效果，打开倒置显微镜，监视器和微操备用;取一皿细胞将其中玻片取出放入小培养皿中，置于倒置显微镜下，于低倍镜下寻找状态良好的细胞，并转入高倍镜下再次确认细胞状态及贴壁情况等;确认细胞后，取电极一根充灌电极内液，弹出气泡，然后套入银丝并插入探头中扭紧旋钮，用注射器管道给电极一点点正压，将电极入水;入水后，查案入水电阻，要在4-8M左右的电极才可以使用，通过调节微操，使电极不断向下接近细胞，待电极尖端逐渐变清晰并且将要接近细胞时停止向下，然后把电极移到细胞上方，调节放大器上的调零旋钮以保证基线在零水平。

　　开始封接：调低微操步进速度，使电极尖端慢慢向细胞靠近，如发现基线方波突然变小，封接电阻上升时，即停止电极下降，通过注射器给电极负压，封接成功的可见方波很快变小，电阻升至G欧。此时，调节快电容补偿按钮，将快电容电流补偿掉，如封接稳定后，准备破膜。

　　破膜：在钳制电位水平- 60mV时，漏电流<20pA，给予比较大的负压(也可根据情况使用ZAP电破方式破膜)，将要破膜时可见基线上下浮动，破膜后，可见基线前后有两个较大的慢电容电流。此时需要观察操作程序上漏电流数值，如果超过50pA，表明漏电流很大，此细胞不能继续实验。如漏电流正常(小于20pA)则继续以下实验：调节慢电容(c-slow)与快电容(c-fast)补偿按钮，将慢电容电流也补偿掉。同时观察破膜电阻Rm(正常500M-1G)、串联电阻Ra(正常5M-15M)，记录膜电容值。设置滤波频率为3.9KHz，采样频率为25-50KHz，要求漏电流小于20pA。

去膜片钳室做，patchmaster只是用来记录和分析动作电位的（如图）；前期细胞液的制备按照protocol来弄