肠道中的厌氧菌培养有什么技巧？

进行肠道中厌氧菌的培养时，以下是一些常见的步骤和建议：

1. 样本收集和处理：从肠道样本中收集所需的样本，注意在采集和处理过程中保持严格的无菌条件。样本处理通常涉及稀释和混匀等步骤，以获得适当的细菌浓度。

2. 初始培养基选择：厌氧菌的培养通常需要使用特定的厌氧培养基。根据你的研究需要和已有的文献，选择适合厌氧菌生长的培养基。一般情况下，常用的厌氧培养基包括厌氧培养基（如Wilkins-Chalgren培养基）、Columbia血琼脂培养基等。

3. 培养条件：将样本接种到培养基中，并在严格的厌氧条件下培养。这可能需要使用厌氧罐、厌氧袋、厌氧操纵箱或厌氧工作台等设备，以确保培养环境中的氧气水平极低。

4. 培养时间和温度：厌氧菌的培养通常需要较长的时间，通常在数天至数周之间。温度方面，一般选择合适的温度范围，如37°C或其他适当的温度。

5. 扩增和分离：在初步培养获得的细菌培养物中，厌氧菌可能与其他菌种混合存在。为了分离和纯化厌氧菌，你可以使用不同的分离技术，如子培养、涂布法、稀释涂布法等。通过连续的传代和筛选，可以分离出纯的厌氧菌培养物。

常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。

　　1．厌氧缸法接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。

　　2．厌氧袋（Bio-bag）即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。塑料袋透明而不透气，内装气体发生管（有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿）、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育。

　　3．厌氧手套箱（Anaerobie glove box）即厌氧培养箱，是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌佳仪器之一。它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气（H2，CO2，N2）达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。

　　4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。

　　5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物（多是植物），消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。

　　6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。焦性末食子酸与碱反应后耗氧。该法用于厌氧不严格的厌氧菌的培养，简单。

初次培养一般都使用选择培养基和非选择培养基。

1）非选择培养基：本培养基使分离的厌氧菌不被抑制，几乎能培养出所有的厌氧菌。常使用心脑浸液琼脂（BHI）、布氏琼脂（BR）、胰豆胨肝粉琼脂（GAM）、胰胨酵母琼脂（EG）、CDC厌氧血琼脂等。

2）选择培养基：为有目的选择常见厌氧菌株，以便尽快确定厌氧的种类。