免疫组织化染色试剂配制和操作步骤？

1. 标本预备

①白腊包埋组织切片：由病理室通例处理

②冰冻组织切片：由病理室通例处理

③细胞爬片：将无菌盖玻片置于六孔板中,接种细胞,待细胞发展达到60％以上后掏出玻片,4%多聚甲醛固定2 h.

2. 试剂预备

①抗体选择

单克隆抗体针对单一表位,具有较高的特异性,但在该表位损坏后将得不到阳性成果;多克隆抗体表位针对多个表位,可防止单克隆抗体的缺陷,但是可能消失非特异性杂交.是以,不管选择单克隆照样多克隆抗体,最好同时购置两个货号的抗体,购置抗体时必定要明白是可以或许做IHC的抗体,抗体解释书上必须有IHC测试成果.假如该分子文献报导较多,可选择文献上经常运用的经典抗体.

②二抗试剂盒

今朝本试验室所用二抗试剂盒为Life Technologies Histostain-Plus Kit (HRP, Broad Spectrum),货号85-9043,一抗反响性有小鼠.大鼠.兔和豚鼠.

③DAB试剂盒

今朝本试验室所用为增强型DAB显色试剂盒,货号DAB-2032.

④其他试剂

二甲苯.无水乙醇.苏木素.中性封片树脂.柠檬酸钠.APES胶

左旋咪唑

配制方法：先将 a ﹣茶酚溶于 DMF 中，加入坚固蓝，再加入 Tris - HCL 缓冲液，最后加入左旋咪唑，完全溶解过滤后立即使用。显色为37℃,15-30分钟，用0.1％中性红复染30秒-1分钟自来水冲洗，丙酮分化5秒钟，流水冲洗。

阳性结果为蓝色，细胞核为红色或紫色。

1.DAB 显色液

先以少量0.05WTB（或0.01MPBS）溶解 DAB ，充分溶解后

加入剩余的 TB 或 PBS ，摇匀后（避光）过滤，显色前加入30%H202，阳性为棕黄色颗粒

冰冻切片、涂片、印片或单层 细胞培养 物按要求进行固定，石蜡切片常规脱蜡后用酶消化处理，然后水化，用0.01mol/L PH7.2---7.4PBS洗5分钟，冷风吹干，放入湿盒中。滴加经稀释的荧光抗体，37℃ 30-60分钟或4℃ 过夜（3）PBS 洗2次，蒸馏水洗1次

50%甘油缓冲液封片

荧光显微镜下检查

对照染色