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最近做C2C12细胞的慢病毒转染,24孔板种了10^5个细胞,1天后转染病毒,转染24小时后换液。设置了MOI的梯度和对应的polybrene对照组。说明书上说转染72-96小时后能看到荧光。但是现在96小时过去了,一点荧光都没有,为啥呀
哼宝Henry
毛利小五郎的徒弟
首先接种的有点少,提高接种量。
huarenqiang5
从以下几点找一下原因:
1.质粒DNA或混和液中含有血清。
2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优
3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好
4.转染试剂选择不当。
5.细胞密度不是最优,优化细胞密度。
6.混和加入细胞中不含血清。在转染过程中使用含有血清的培养基,细胞状态良好有利于转染效率的提高。
7 .转染体系中含有抑制物。
8.转染试剂保存不正确,转染试剂保存在4℃。