构建稳转株是用哪种转染试剂好？PEI的使用方法如何？

只要能把质粒转进去，哪种转染试剂都可以，pei也可以，毒性低，效率高

构建稳转细胞株的基本原理是用脂质体转染质粒或慢病毒感染的方法将构建好的含外源目的基因的载体导入细胞，根据不同的基因载体中所含的抗性标志选用相应的药物进行选择性筛选，得到传代过程中可稳定表达目的基因或者稳定沉默特定基因表达的细胞株。

PEI转染试剂的使用方法：

　　1、接种细胞：

　　对于贴壁细胞，转染前18-24 h进行铺板（不含抗生素），使其在转染时的密度大约在80%左右。对于悬浮细胞，转染当天，配制EZ Trans-DNA复合物之前进行铺板，每500 µL生长培养基中加入4~8×105cells。

　　2、准备EZ Trans-DNA复合物：

　　a、对于每孔细胞，将1 μg质粒DNA稀释到40 μL无血清的高糖DMEM培养基（或者OPTI-MEMⅠ培养基），混匀。

　　b、对于每孔细胞，将3 μL EZ Trans转染试剂稀释到40 μL无血清的高糖DMEM培养基（或者OPTI-MEMⅠ培养基），轻轻混匀。

　　注：无血清的高糖DMEM培养基是稀释液，不能使用含血清的培养基进行DNA和EZ Trans转染试剂的稀释。因为EZ Trans-DNA转染复合物的形成过程不能含有血清。

　　c、将稀释好的EZ Trans转染试剂尽快全部加入到已稀释好的质粒DNA中，轻轻混匀。

　　d、室温放置10-15 min，以形成EZ Trans-DNA复合物。

　　　3、转染细胞：

　　a、将上述80 μL EZ Trans-DNA转染复合物均匀滴入到含细胞的培养皿中。轻轻晃动培养皿或轻微振荡，让EZ Trans-DNA复合物分散均匀。

　　b、在37℃，5% CO2培养箱培养6-18 h，去除含EZ Trans-DNA复合物的培养液，更换新的培养液，继续培养至对转入基因表达分析。