dxywode
如遇转染效果不佳,可采取优化方案对实验进行优化:
1. 优化转染条件包括:转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。
2. 同时细胞污染也是造成细胞死亡,转染效率低下的一大原因。转染细胞用的质粒必须保证无菌。分享一个小秘诀:将提完质粒后或者提的最后一步,用75%乙醇沉淀,这样就除菌了。
3. 转染用的质粒首先要保证数量,一般为2μg以上。如果质粒纯度不够或者含有细菌LPS或其他对细胞有毒害作用的物质,需要对质粒进行纯化和浓缩。
4. 一般进行转染的细胞应该处于对数生长期。如果是贴壁细胞的话,贴壁率应该在70-80%;如果是悬浮细胞的话,应该是6×10^5个/孔(24孔板),一般是转染前一天换液,转染前用无血清培养基或PBS洗细胞一次。
天一湖医者
bamboopiggy
悬浮细胞最好用离心的方法转染,你仅仅用lipo3000,确实差点