dxy_n4jex0k8
质粒用的是碧云天pCMV–C-DsRed,基因大小七百多,测序正确,且质粒dsred自带atg。
用碧云天lipo8000转染
48h后染色,空载红色荧光有一点点点,重组载体基本没有,用细胞爬片,红光亮度90%,40X也看不见。但是dapi染很好,绿色荧光蛋白也很亮,细胞也没有叠在一起。
除了是质粒提取纯度问题影响转染还会有哪儿踩坑了呢?
求大神救救孩子
bamboopiggy
可能是你质粒构建有问题,尤其是diRed,容易产生移码,先检查质粒,如果没有问题,可以进行流式分选后,再做。
汤姆卜丽波
可能还是转染没转上,先试试转个细菌拍一下有没有信号,再转293
balalaLy
转染试剂或者细胞状态不好也会影响转染效率
天一湖医者
可能是padtrack-cmv上一个表达信号出了问题,建议重新试一下