相关实验:GST 融合蛋白的亲和纯化实验
dxy_4ykvvto5
2024-07-13
请问在BL21中诱导一个带GST标签膜蛋白的表达,一共110kD。目前试了37℃ 200rpm诱导5h,设置了从0到2mM的iptg。每次诱导后先取了一些菌液离心,然后加loading吹打后100℃煮10min,然后先进行SDS PAGE检测有没有目标蛋白,但是一直没诱导出来。
帮师姐诱导的一个线粒体内膜上的蛋白,也是加了GST后110kD左右,25℃ 16h一次就诱导出来了,我自己的蛋白也试了这个条件,但不行。
请问这样直接煮菌体,能将包涵体的中的蛋白也煮出来吗?另外,求一个诱导办法!
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救命了,GST纯化挂柱少就算了,杂带多而且还有伴随杂带!
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