GST 融合蛋白的亲和纯化实验

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验介绍了应用与谷胱甘肽-S-转移酶融合的蛋白质（GST 融合蛋白）来亲和纯化其他蛋白质，又称 GST 共结合纯化方法。这种共结合技术可用来补充评估蛋白质-蛋白质相互作用的其他方法：体外检测方法，如电泳迁移率变动分析（EM- SA）或免疫共沉淀；或体内检测方法，如双杂交相互作用阱和以泛素为基础的脱落蛋白感应器。

来源《精编分子生物学实验指南（第五版）》

来源：丁香实验

操作方法

GST 共结合纯化法

1. E.coli 可溶性蛋白抽提物放置在冰上解冻。2. 每个反应取 500μl 解冻的 E.coli 提取物于 4℃，175000 g (使用 Beckman TLA-100 转子为 70000r/min）离心 30 min。3. 转移上清液（不小于 400 μl）到 2 个试管中，每管 200 μl，并冰浴保存。4. 在一支含 200 μl 步骤 3 获得的上清液试管中加入 1~5 μl [3