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请问跑泛素化应该配多大浓度的胶,转膜的电流大小及时间是多少,以及PVDF膜用0.45还是0.22?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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dxy_mzhnosd9

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1 个回答

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百泰派克-李工

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1、凝胶的浓度:

对于大多数蛋白质,使用 8-12% 的SDS-PAGE凝胶是比较常见的。如果目标蛋白较小(<20 kDa)或者非常大(>200 kDa),可能需要使用更高或更低浓度的凝胶。

2、电泳的电流和时间:

通常情况下,电泳的电流设置为常电流(constant current)模式,电流大小一般为 15-25 mA(每个凝胶槽)。电泳时间取决于凝胶的厚度和蛋白的大小,通常在1-2小时之间。

3、PVDF膜的孔径:

0.45 µm 和 0.22 µm 是两种常用的PVDF膜孔径。对于大多数应用,0.45 µm 的孔径足够了。如果目标蛋白非常小,使用 0.22 µm 孔径的膜可以提高蛋白的捕获效率。

这些参数可能需要根据您的特定实验条件进行优化,建议您参考蛋白质印迹试剂盒的说明书或相关的科学文献,以获取最准确的实验设置。


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