百泰派克-李工
WB(Western Blot)条带周围浅色而中间较黑的现象通常是由于蛋白质过载或者检测过敏所致。当样品中蛋白质含量过高,超出了膜的结合能力或者检测系统的线性范围时,就可能出现中间较黑而边缘较浅的条带。这种情况下,中心部分的蛋白质过多,导致抗体饱和,而边缘处蛋白质相对较少,抗体结合不饱和,因此显色反应在中心更为显著。
为避免这种情况,可以尝试以下方法:
1.稀释样品:
减少加载的蛋白质量。
2.优化抗体浓度:
调整一抗和二抗的浓度,以避免过敏。
3.调整显色时间:
减少显色反应的时间,防止过度显色。
确保样品的蛋白质浓度适中且抗体浓度适当,可以提高WB实验的准确性和重复性。
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我感觉这个应该是发光液的问题,你可以先把膜放在TBST涮几遍,然后用滤纸把膜上的水分擦干,然后把膜平铺在蜡板上,再把放光液铺在膜上,可以试一下