balalaLy
制胶的问题:玻璃板没有洗干净或者胶没有凝好导致有拖尾,中间位置很脏,膜要充分激活,封闭以及一抗之后洗膜要充分,可以增加洗膜时间和次数以及tbst中土温的含量
土井挞克树
一抗浓度太高,建议降低一抗的孵育浓度
sswei
1.一抗非特异性与蛋白结合,此种情况大多数情况是因为一抗特异性不好。
解决方式:换个公司的一抗。一抗不便宜,在买一抗的时候多选择几家,看高质量文章里的抗体公司,酌情考虑购买。
2. 目的蛋白有多个修饰位点,有些一抗还能结合其他蛋白的结合位点。
解决方式:更换一抗品种,看接合位点。
3. 蛋白样品降解,蛋白酶将目标蛋白分解成若干个蛋白而这些蛋白同样可以被一抗识别。
解决方式:首先是加蛋白酶抑制剂;其次是不要多次解冻,每次解冻都可能讲解蛋白。
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