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适合进行蛋白质组定性分析的样本主要有以下特点:
1. 样本来源广泛,可使用细胞、组织、体液等不同类型样品。
2. 样本量需要达到一定丰度,至少百万分之一微克量级蛋白,才能进行鉴定。
3. 蛋白组成相对复杂,富含需要分析的蛋白类型。
4. 样本处理方法需要适当,能有效裂解组织,提取完好的蛋白。
5. 尽量选择新鲜或者快速冷冻样本,避免降解。
6. 可以去除高丰度蛋白或富集低丰度蛋白,减少蛋白表达量级跨度。
7. 如果有特定目标蛋白,需要合理设计富集方法。
8. 需要确保样本清洁,减少盐类、脂质等污染物的干扰。
9. 同一样本需要提取足量的蛋白进行重复试验。
10. 实验操作过程需要标准化,控制技术变异。
总之,样本的质量和预处理是成功定性分析的基础。
土井挞克树
动植物组织,细胞的裂解液等样本,蛋白样本都可以做蛋白定性分析
生化检验分析
蛋白质定性分析:确定样品中是否有蛋白质存在,以及存在的是何种蛋白质。
蛋白质定性分析通常是指利用质谱法进行蛋白质鉴定和序列分析。蛋白质定性分析分为top-down分析和bottom-up分析两种策略。目前,bottom-up分析策略被更广泛的应用于蛋白质定性分析工作。
Bottom-Up(自底向上)和Top-Down(自顶向下)两种策略“自底向上”策略是指通过分析由蛋白质酶解生成的肽段来鉴定蛋白质。当应用该策略来分析蛋白质组混合物时,因其类似于基因组测序的鸟枪法,所以又被称为鸟枪法蛋白质组学(Shot-gun Proteomics)。“自顶向下”策略直接鉴定完整蛋白质,在翻译后修饰和蛋白质同素异构体鉴定方面有一些潜在的优势。可是该策略的缺陷是蛋白质在气相中分离、电离及碎裂都十分困难。而鸟枪法蛋白质组学由于将蛋白质酶解成肽段,使其在气相中更容易被分离、电离和碎裂。
sswei
可以用于分析的蛋白样本类型很多,包括动植物/微生物细胞或细胞裂解液、动植物组织、体液样品如血清/血浆/尿液等、蛋白胶条/胶点以及Pull down/Co-IP/IP蛋白样本等。
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