求助：WB出现双条带，部分条带不显示

抗体的原因：不同厂家的抗体特异性会出现不同的差异，大部分都能检测到目的条带，但是有时能检测到非特异性的条带；

蛋白亚型表达的原因：做WB经常会发现，一种蛋白有时检测压型很明显，有时不是很明显。参考了很多文献的结果，均有此种情况出现，即使是大家都觉得很确定的蛋白很多时候也会出现不同的亚型。毕竟对很多蛋白认识有限。这种情况不要怕的，尽管按照真实结果去处理，千万不要为了让结果好看或者符合大家的意思而去做修改。

3.实验技术的原因：曝光的时候会有底片轻微移动的现象，出现很接近的两条。

4.目的蛋白部分降解，也可能会出现相近的两条带。如何去掉杂带？先找找你的目的蛋白的分子量，这样就能分辨出那个条带是你像要的。尽量减少蛋白的降解在样品的处理过程中。

考虑以下几点原因及建议:

1.抗体的原因：不同厂家的抗体特异性会出现不同的差异,大部分都能检测到目的条带,但是有时能检测到非特异性的条带。

2.蛋白亚型表达的原因。

3.实验技术的原因：曝光的时候会有底片轻微移动的现象,出现很接近的两条。

4.目的蛋白部分降解,尽量减少蛋白的降解在样品的处理过程中。

5.建议再做mRNA进一步验证。

有以下几点分析:

1. 双条带可能是由于蛋白降解或变性不充分导致。可以优化样品制备,增加变性和抑制蛋白酶。

2. 右侧内参也双条带,提示问题可能在样品制备上,全样本都存在。

3. 27kDa条带不显示,可能是转移不充分导致小分子蛋白丢失。可以调整转膜条件,增加甲醇等。

4. 也可能是27kDa蛋白表达过低或被降解,在所有样本中都检测不到。

5. 建议重复试验,对照转染前样品作为阳性对照,以排除卵泡问题。

6. 检查各步骤如抗体稀释、洗膜、显色等操作是否合适。

7. 若问题仍存在,则需要进一步优化从样品制备到化学发光各个环节,使条带清晰。

综合来说,主要从样品制备和转膜两个方面着手优化,辅以重复实验对照比较,以找到原因。