WB情教求助，加了四个样本，目的条带出现了六个（额外的两个是最左边marker孔和

可能的原因：1.样品本身纯度不够；2.所用的溶剂（例如loading buffer）含有蛋白质污染；3.目的蛋白发生降解，杂带实际是目的蛋白的分解肽段

可能的原因:

1. 最左边marker孔和最右边空白孔出现条带,可能是因为样本上样时跨孔污染造成的。

2. 操作上样时,尽量避免不同样本间的接触和污染。

3. 也可以在marker和样品间,样品之间留出1-2个空孔,以防止跨孔污染。

4. 再次重复WB实验时,留意上样操作,避免样品间的接触。

5. 样品制备时也要注意材料的清洗与更换,防止交叉污染。

6. 如果问题重复出现,考虑是否有实验室设备如移液器等的污染问题。

7. 内参条带正常显示其他3个样品条带清晰,则Western Blot实验本身问题不大。

考虑以下几点原因:

①细胞传代次数过多会使得蛋白表达不同。

②体内表达的蛋白样本具有多种修饰形式。

③蛋白样本降解。

④可能检测到未经报道的新蛋白或同一蛋白家族中具有相似表位而结构不同的蛋白。

⑤一抗浓度过高或孵育时间过长。

⑥二抗浓度过高或孵育时间过长。

⑦蛋白样品可能没有充分变性，从而残留多聚体。