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为什么用cdna克隆这一步用普通的酶跑出来条带很亮,用高保真酶克隆就没有目的条带呀

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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dxy_o3jqgbgq


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4 个回答

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毛利小五郎的徒弟

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首先看高保真酶是否变性,其次要看高保真酶是否匹配

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huarenqiang5

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考虑可能是:1.你用普通酶扩增得到的不是特异性条带;2.你的高保真酶有问题。

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loveliufudan

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在使用cDNA克隆进行实验时,使用普通的酶(如Taq DNA聚合酶)可以产生较亮的条带,而使用高保真酶(如Pfu DNA聚合酶)则可能没有明显的条带。这可以归因于两种酶的不同特性。

普通的酶(如Taq DNA聚合酶)在DNA复制过程中具有较高的错误率,即其复制产物可能包含一些错配碱基。这些错误可以导致局部DNA序列的变异,从而在电泳结果中产生明亮的条带。这些条带的明亮度可能与不同的错配碱基数量有关。

相比之下,高保真酶(如Pfu DNA聚合酶)具有较低的错误率,能够在复制过程中更准确地复制DNA序列。这意味着使用高保真酶进行cDNA克隆可能会产生更少的错配碱基,从而在电泳结果中可能没有明显的条带。

选择使用普通的酶还是高保真酶进行cDNA克隆,取决于实验的目的和需求。如果您希望在电泳结果中能够观察到明亮的条带,并且不介意可能的错配碱基引入,那么使用普通的酶可能更适合。而如果您更关注克隆的准确性和序列的保真度,那么选择使用高保真酶可能更合适。

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sswei

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实验过程中可能模板量太少的缘故。

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