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WB实验中,内参出现上下两个条带,是什么原因?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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dxy_yn5g3wy9


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4 个回答

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sswei

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具体原因可能是该蛋白出现了同源二聚体,故都可以被抗体识别出来或者该蛋白有部分降解,但是未降解部分依然可以和抗体结合,另外抗体特异性不高,也会出现非特异性的结合,造成出现两条或者多条带,所以Western blot会出现两条带

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dxyc42u

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loading buffer 有问题,二抗没必要孵育2小时,室温1小时就将可以。至于内参,一抗二抗室温各孵育30min都行

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loveliufudan

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内参(参考蛋白)出现上下两个条带时,可能是由以下几个原因造成的:

1. 表达多个变异形式:内参蛋白可能存在多个变异形式,例如剪切异构体或翻译后修饰引起的不同形式。这些变异形式可能具有不同的分子量,导致上下两个条带的出现。

2. 翻译后修饰:内参蛋白可能受到翻译后修饰的影响,如磷酸化、糖基化或乙酰化等。这些修饰可以导致蛋白的分子量发生变化,从而产生上下两个条带。

3. 降解或裂解产物:内参蛋白可能被降解或裂解为多个片段,在Western Blot中显示为上下两个条带。

4. 蛋白交联:某些情况下,内参蛋白可能与其他蛋白发生交联,形成复合物或聚合物。这种交联可能导致蛋白复合物的分子量增加,从而产生上下两个条带。


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毛利小五郎的徒弟

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考虑是你样本本身问题,极有可能是样本发生降解了。


解决办法有两个,一是优化蛋白提取流程,防止降解;二是选用针对N末端的抗体,比如Proteintech 66009-1-Ig。

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