sswei
具体原因可能是该蛋白出现了同源二聚体,故都可以被抗体识别出来或者该蛋白有部分降解,但是未降解部分依然可以和抗体结合,另外抗体特异性不高,也会出现非特异性的结合,造成出现两条或者多条带,所以Western blot会出现两条带
dxyc42u
loading buffer 有问题,二抗没必要孵育2小时,室温1小时就将可以。至于内参,一抗二抗室温各孵育30min都行
loveliufudan
内参(参考蛋白)出现上下两个条带时,可能是由以下几个原因造成的:
1. 表达多个变异形式:内参蛋白可能存在多个变异形式,例如剪切异构体或翻译后修饰引起的不同形式。这些变异形式可能具有不同的分子量,导致上下两个条带的出现。
2. 翻译后修饰:内参蛋白可能受到翻译后修饰的影响,如磷酸化、糖基化或乙酰化等。这些修饰可以导致蛋白的分子量发生变化,从而产生上下两个条带。
3. 降解或裂解产物:内参蛋白可能被降解或裂解为多个片段,在Western Blot中显示为上下两个条带。
4. 蛋白交联:某些情况下,内参蛋白可能与其他蛋白发生交联,形成复合物或聚合物。这种交联可能导致蛋白复合物的分子量增加,从而产生上下两个条带。
毛利小五郎的徒弟
考虑是你样本本身问题,极有可能是样本发生降解了。
解决办法有两个,一是优化蛋白提取流程,防止降解;二是选用针对N末端的抗体,比如Proteintech 66009-1-Ig。
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